Рабочие инструменты репродуктолога

 

 

В Мексике на свет появился первый ребёнок, который безошибочно сможет считать родителями сразу трёх человек, — для его зачатия впервые была использована особая методика - донорство митохондриальной ДНК (мДНК) .

 

Донорство мДНК

Во время такой процедуры из яйцеклетки матери извлекается ядро и переносится в яйцеклетку женщины-донора, из которой также было удалено ядро. В итоге получается яйцеклетка с ядерной ДНК матери и митохондриальной ДНК донора. Затем яйцеклетка оплодотворяется спермой отца будущего ребёнка.

Сейчас мальчику уже пять месяцев, он, как и все обычные дети, унаследовал ДНК от матери и от отца, а также крошечный кусочек генетического кода от донора. Американские медики (почему американские, расскажем ниже) использовали беспрецедентную методику зачатия для того, чтобы ребёнок не унаследовал генетические заболевания, которые несёт в своих генах его мать из Иордании.

 

 

 

 

Какие же инструменты нужны для подобной манипуляции?

Эмбриологическую лабораторию можно смело назвать основой современного центра репродукции. Именно здесь осуществляются как основные, так и подготовительные этапы лечения бесплодия методами  ВРТ:

• Исследование эякулята (спермограмма);
• Подготовка спермы к искусственной инсеминации;
• Криоконсервация и хранение биоматериала (яйцеклеток, спермы, эмбрионов);
• Проведение экстракорпорального оплодотворения ( ICSI, IMSI );
• Культивирование  и мониторинг эмбрионов.

 

1. Исследование эякулята

В соответствии с требованиями ВОЗ, рекомендуется использовать фазово-контрастный микроскоп с планахроматическими объективами  10x, 20x, -для работы в фазовом контрасте с нативным препаратом,  40x, 100x -для работы  с окрашенными препаратами (Diff-Quick).

Первичная микроскопия спермы включает в себя исследование на увеличении 100х (т.е. 10х объектива в паре с окуляром 10х). Это обеспечивает обзор образца, чтобы увидеть:

• появление нитей слизи;
• агрегация спермы или агглютинация;
• наличие посторонних клеток, например, клетки эпителия, "круглые клетки" (лейкоциты и незрелые зародышевые клетки) и изолированные головки спермиев или хвосты.
• подвижность спермы

Препарат также исследуется  при увеличении 200х или 400х  (т.е. комбинацию  объектива 20х или объектива 40х с окуляром 10х). Это позволяет: оценить  подвижность сперматозоидов а также определить нужное разведение для точной оценки количества спермы.

Для оценки морфологии сперматозоидов необходимо увеличение 1000х (комбинация объектива 100х и окуляра 10х) и окраска по методу Diff-Quick (наиболее распространенной для этой задачи).

Традиционо, оценку подвижности и все подсчеты делали вручную, что подвергало глаза врача нагрузкам и вызывало усталость к концу рабочего дня. С появлением камер для микроскопии  были разработаны специальные решения для анализа спермы. Они позволяют работать с изображением на мониторе, а не с окулярами, что снижает нагрузку на глаза и, что самое важное -автоматизацию рабочего процесса. Одно из таких решений - программное обеспечение VideoZavr Sperm. Оно сочетает в себе базу данных а также все необходимые инструменты для анализа спермы :

1. Оценка подвижности в фазовом конрасте, при этом записывается видеоролик подвижности, который можно оценивать в любое время вне зависимости от жизнеспособности препарата;
2. Оценка морфологии по строгим критериям Крюгера, при этом программа сама определяет наличие палологии головы  и указывает врачу;
3. Оценка жизнеспособности сперматозоидов (Vitality test) ;
4. Класификация по группам A+B, C, D и расчет подвижности и количества сперматозоидов;
5. Подготовка подробных отчетов  на бланке  клиники для пациента;
6. Возможность консультаций коллег и межлабораторного контроля;
7. Наличие справочника по пробоподготовке для улучшения качества анализируемых препаратов.

 

Все необходимые функции реализует микроскоп Olympus CX41  в комплекте с цифровой камерой и ПО VideoZavr Sperm. Опционально микроскоп можно оборудовать подогреваемым столиком для более

 

Olympus CX41  в комплекте с ПО VideoZavr Sperm

Микроскоп комплектуется высокоскоростной камерой, которая фиксирует подвижность сперматозоидов с максимально высокой скоростью и разрешением для дальнейшей обработки в ПО. Цветопередача камеры позволяет безошибочно проводить анализ морфологии по строгим критериям Крюгера без необходимости длительной настройки и калибровки программы.

Высокое качество оптики и длительный срок  службы (25 лет) микроскопов Olympus являются ключевыми параметрами при выборе микроскопа для анализа спермы.

 

2.Проведение экстракорпорального оплодотворения (ICSI, IMSI)

Для проведения манипуляций с гаметами микроскоп должен быть оборудован методами контрастирования (модуляционный контраст Хоффмана ORC,NAMC,Varel, Дифференциально-интерференционный контраст, Nomarski DIC) и микроманипуляторами.

Для этой задачи применяются  инвертированные микроскопы исследовательского Olympus IX53, (Olympus IX73/IX83), на который установлены высококачественные микроманипуляторы (моторизованные или механические).  Температуру рабочей  поверхности микроскопа поддерживает специальная стеклянная вставка.  Все это в комплексе позволяет эффективно проводить такие сложные манипуляции, как ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида), хетчинг, ПГД (преимплантационная генетическая диагностика) и обеспечивает высокую результативность методов ВРТ.

 

 

Olympus IX53  в комплекте с гидравлическими микроманипуляторами и цифровой камерой

 

 

В комплектацию инвертированного микроскопа для ICSI, IMSI должны входить объективы 10х, 20х,40х, 100х.

Стоит помнить, что метод  DIC работает только со стеклянной посудой. Если Вы планируете работать с пластиковой посудой- лучше использовать рельефный контраст (модуляционный контраст Хоффмана),  а для методик, где нужен DIC- использовать стеклянную посуду.

Иногда приходится показывать коллегам некоторые манипуляции с клетками. Для отображения на мониторе манипуляций с клетками на микроскоп устанавливается камера для микроскопии  с достаточным разрешением на увеличении 20х, 40х ( 2.3- 3.1 МПикс) и скоростью съемки 12- 41 к/сек на полном разрешении.Это позволит работать в режиме реального времени без зависаний и потери разрешения.

 

3.Культивирование  и мониторинг эмбрионов

Для мониторинга эмбрионов применяются стереомикроскопы Olympus SZ61, SZX7, SZX10, SZX16.

Часто стереомикроскопы встраиваются в ламинарные боксы или "рабочие станции ЭКО" обеспечивающие высокую биологическую защиту материала в ламинарном потоке подаваемого воздуха. Специально подогреваемая рабочая поверхность регулируется на нужную температуру и создает условия, приближенные к тем, в которых эмбрион находится в организме матери. Таким образом, эмбриологу удается безопасно работать с клетками с помощью встроенного микроскопа.

 

 

Работа эмбриолога в ламинарном боксе со встроенным Olympus SZX10

 

 

При выборе стереомикроскопа для работы с яйцеклетками и эмбрионами немаловажное значение имеет увеличение и фокусное расстояние объектива. Чаще всего для работы используется увеличение 120х-200х.

Стереомикроскопы Olympus   имеют большой выбор объективов, что позволяет максимально удобно организовать работу эмбриолога, обеспечивая максимальное разрешение и качество изображения.

Эмбриологическая лаборатория – это единая система, где  сложные  приборы и новейшие технологии объединяются в руках профессионалов-эмбриологов для создания новой жизни. Школа микроскопии всегда рада помочь специалистам в выборе рабочих микроскопов для комфортной и качественной работы.